Полезная информация

Бурный прогресс в области молекулярной биологии в последние десятилетия сопровождался возникновением новых методов исследования, основанных на использовании моноклональных антител, метода гибридизации на фильтрах и полимеразной цепной реакции (ПЦР).

Эти методы нашли применение в медицине при диагностике различных заболеваний. В результате сформировалась новая ветвь клинической лабораторной диагностики – молекулярная клиническая диагностика.

Молекулярная клиническая диагностика – это наука, осуществляющая диагностику болезней на молекулярном уровне и основанная на выявлении специфических генов и продуктов их деятельности – белков. Такие новейшие методы молекулярной клинической диагностики инфекционных заболеваний как иммунофрементный анализ (ИФА) и полимеразная цепная реакция (ПЦР) в настоящее время быстро вошли в медицинскую практику и значительно подняли общий уровень диагностики в целом. Эти лабораторные исследования позволяют получить ответ в кратчайшие сроки, причем по точности они близки к 100 %. Однако указанные методы позволяют оценить ситуацию с разных сторон.

Врач может назначить не только ПЦР анализ, но и провести ИФА — диагностику для выявления определенной инфекции. С точки зрения пациента подобный комплекс исследования вызывает много вопросов, поскольку все лабораторные анализы на первый взгляд кажутся абсолютно одинаковыми. Но, несмотря на внешнюю схожесть, разница между ПЦР и ИФА есть.

Иммуноферментный анализ (ИФА) Этот метод позволяет:

 • объективно выявлять реакцию организма человека в ответ на контакт с инфекционными агентами, выражающуюся в выработке специфических антител IgG, IgM, IgA

• обнаруживать специфический клеточный ответ

• обнаруживать антигены некоторых микроорганизмов

Для определения некоторых микроорганизмов, например Rubella virus, иммунологический подход предпочтительнее других

Диагностика по методу иммуноферментного анализа выявляет не возбудителя, а специфические белки - антитела, которые вырабатываются собственной иммунной системой человека в ответ на атаку вирусов или бактерий.

Иногда ИФА дает положительный результат у человека, переболевшего инфекционной болезнью в прошлом и уже не нуждающегося в лечении в настоящем. Это случается оттого, что иммунная система долгое время сохраняет «память» о перенесенных болезнях, а о некоторых из них даже на протяжении всей оставшейся жизни человека. Результат ИФА изредка может получиться ложноотрицательным, если с момента заражения прошло еще недостаточно времени, и организм не успел среагировать на инфекцию выработкой специфических белков-маркеров. Эти факторы следует учитывать при интерпретации результатов, поэтому в сомнительных случаях результаты ИФА перепроверяют, для чего используют ПЦР.

ПЦР-диагностика позволяет с высочайшей точностью выявить не только возбудителя болезни (бактерию, вирус), но и малейший фрагмент его ДНК, который является неповторимым для каждой формы жизни. Поэтому ПЦР иногда называют ДНК-диагностикой, а специфичность этого анализа по некоторым технологиям достигает 100 %, причем он способен выявлять даже вялотекущие и хронические инфекции, не поддающиеся диагностике с помощью ИФА. ПЦР-анализ позволяет не только определить, какой тип возбудителя присутствует в организме, но и дает его количественную оценку, то есть показывает, как много микробов присутствует в организме человека. Количественный анализ ПЦР является очень важным в диагностике и в оценке эффективности лечения многих хронических инфекций (например, вирусного гепатита C).

В случае сравнения результатов, полученных в ИФА и ПЦР, несовпадения могут быть следующими:

- положительный результат в ПЦР и отрицательный результат в ИФА;

 - отрицательный результат ПЦР и положительный результат ИФА.

Положительный результат ПЦР и отрицательный - ИФА наблюдается, если у пациента имеется инфекция, но организмом не формируется иммунный ответ в виде антител.

Такое же несовпадение результатов может быть обусловлено наличием «серологического окна». «Серологическое окно» - период от инфицирования до сероконверсии. Сероконверсия - появление в сыворотке специфических антител в количестве, позволяющем их выявить с помощью современных иммунологических методов.

Выявление ДНК/РНК вируса методом ПЦР позволяет уменьшить продолжительность «серологического окна» в среднем на 11 дней и обнаружить патоген уже через 1-2 недели после заражения.

Кроме того, отрицательный результат ИФА на фоне положительного результата в ПЦР может наблюдаться у иммуносупрессированных пациентов и новорожденных с перинатальной инфекцией (кроме нетипичной картины, связанной с антителами матери). Кроме того, важно учитывать возможность высокой генетической изменчивости микроорганизмов, которая приводит к формированию серонегативных штаммов.

При обследовании новорожденных на наличие внутриутробных инфекций может быть получен ложноотрицательный результат серологического исследования не только вследствие влияния высокой концентрации материнских антител класса IgG, которые маскируют наличие IgM у ребенка.

Генетически обусловленная серонегативность ряда заболеваний делает их недоступными для анализа стандартными серологическими методами, а при исследовании методом ПЦР обеспечивается положительный результат.

Второй вариант несовпадения результатов ПЦР и ИФА (отрицательный результат в ПЦР и положительный результат в ИФА) может быть обусловлен выявлением «иммунологического следа». «Иммунологический след» – это остаточный уровень IgG после ранее перенесенной инфекции. У некоторых людей повышенный уровень антител может сохраняться многие месяцы и годы после полного выздоровления, что связано с индивидуальными особенностями иммунной системы.

Другой причиной расхождения результатов может стать использование родоспецифических тест-систем для ИФА.

Еще одним фактором несовпадения данных ПЦР и ИФА является зависимость результатов анализа методом ПЦР от используемого материала. Материал для ПЦР должен быть получен из места предполагаемой локализации инфекционного и/или неинфекционного воспалительного процесса.

Взаимодействие лабораторной службы и врачебного персонала, является необходимым условием эффективной диагностики. Назначение тех или иных диагностических исследований целиком и полностью зависит от лечащих врачей.

Однако, стремительное развитие диагностической медицины приводит к тому, что клиницисты не могут в полной мере оценить возможности современных технологий. Часто недостаточная осведомленность или невозможность назначить нужное исследование, неправильный забор пробы приводят к тому, что уже на первом этапе допускаются ошибки, снижающие результативность использования дорогих и высокоинформативных технологий. В первую очередь необходимо отметить комплексность современной лабораторной диагностики. На начальном этапе принятия решения о подборе необходимого комплекса диагностических мер требуется ставить вопрос о разумном сочетании как новейших, так и хорошо зарекомендовавших себя традиционных методов исследования с целью верификации присутствия инфекционного агента у пациента.

ПЦР- или ИФА-диагностика дополняют другие методы для достижения реальных, точных, достоверных результатов. Комплексное обследование пациента различными лабораторными методами дает возможность врачу-клиницисту получать более полную информацию как о наличии инфекционного агента, так и об иммунном статусе. Это позволяет более точно ставить диагноз, назначать соответствующее этиотропное лечение и вести последующий контроль терапии. Таким образом, для того чтобы назначать этиологическое, а не синдромальное лечение, необходимо проводить мультифакторное исследование, стремясь точно определить роль того или иного патогена в конкретной клинической картине.

Материал подготовлен на основании открытых интернет источников.